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原代细胞永生化


        细胞作为组成生物体的基本单位一直是重要的研究材料。原代细胞由于其功能、代谢、形态等方面接近体内细胞而备受青睐。但原代细胞的增殖潜力有限,无法长期传代,从而难以在一次分离中获得大量细胞。随着研究人员的不断努力,如今我们已经有了让原代细胞“长生不老”的手段--原代细胞永生化。

        当前的技术手段中,基于慢病毒载体的猿猴病毒40(SV40)大T抗原和端粒酶(hTERT)诱导的原代细胞永生化最为简单可靠,应用广泛。我们采用同时转导SV40大T抗原和hTERT基因的方法,获得的永生化细胞传代更加稳定!

实验流程
01
SV40大T抗原和hTERT基因载体构建及慢病毒包装;
02
感染目的细胞;
03
阳性细胞抗性筛选;
04
挑单克隆;
05
QPCR验证;
06
连续传代验证;
07
免疫荧光鉴定。
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