​背景介绍：

RAW 264.7 细胞是一种广泛使用的鼠巨噬细胞细胞系，来源于患有 Abelson鼠白血病病毒诱导肿瘤的雄性小鼠腹水，通常用于免疫学和传染病研究。作为一种永生化细胞系，RAW264.7细胞是研究巨噬细胞生物学的关键模型系统，包括对病原体的免疫反应、信号转导和基因表达。这些细胞可以极化为与炎症反应相关的 M1巨噬细胞或与组织修复和抗炎过程相关的M2巨噬细胞。RAW264.7细胞还可以在某些条件下可以被诱导分化为破骨细胞样细胞，例如暴露于RANKL（核因子κB配体的受体激活剂），使其成为研究破骨细胞生物学和骨吸收某些方面的模型。RAW264.7细胞系对各种刺激的反应，包括诱导细胞焦亡，这是一种由 LPS（脂多糖）等因素触发的炎症细胞死亡过程），有助于剖析导致炎症细胞因子产生的途径。

细胞培养：

RAW 264.7形态为圆形和梭形细胞，趋向聚集生长，贴壁松散。当细胞密度较高时，聚集的细胞团会释放到培养基中。该细胞对基础培养基及血清质量敏感，需使用高品质试剂，以免引起细胞极化。亿泽丰实验室使用RPMI-1640+10%FBS来培养RAW 264.7，细胞形态良好，95%以上均为圆形。

RAW 264.7（相差200X） 货号：YCL-0337

RAW 264.7传代可使用刮刀或胰酶消化收集细胞，亿泽丰实验室的RAW 264.7可直接使用胰酶消化传代（0.25%胰酶37℃消化1min后及时终止），而不影响细胞形态和活力。

诱导极化：

1. 诱导为M1型

细菌和脂多糖（LPS）可以诱导巨噬细胞向M1型分化，产生促炎细胞因子，在实验中可采用2.5ng/mL IFN-γ和200ng/mL LPS共同作用12小时诱导其极化成M1亚型。iNOS和CD86可作为M1亚型标志物。

2：诱导为M2型

白细胞介素（IL-4）可以诱导巨噬细胞向M2型分化，分泌抗炎细胞因子，在实验中可采用10ng/mL IL-4作用12小时诱导其极化成M2亚型。MR和Arg-1可作为M2亚型标志物。

3：诱导为破骨细胞

RANKL可诱导巨噬细胞向破骨细胞分化。（Tip:RANKL (TNFSF11) 属于 TNF 家族。RANKL 是一种 II 型跨膜蛋白，是 NF-κB (RANK) 配体的受体激活剂。RANKL 是 RANK 的激活剂。RANKL 与 RANK 结合，诱导单核细胞/巨噬细胞谱系细胞分化为破骨细胞，并导致破骨细胞前体成熟。）实验中可使用20ng/mL RANKL作用4-5天诱导其分化为破骨细胞。TRAP染色可用于鉴定破骨细胞。

常见问题：

Q：为什么收到的RAW264.7细胞漂浮在培养基中，怎么处理？

RAW264.7贴壁松散，运输过程中的晃动、低温等不利因素会使细胞脱落，可离心收集后重新接种细胞，一般不会影响细胞状态。

Q：能否使用刮刀进行RAW264.7传代？

可以。但刮刀会对细胞产生机械损伤，需要注意手法。

Q：为什么破骨诱导不成功？

检查RANKL试剂浓度及效期，另外不要使用高代次RAW264.7进行破骨诱导，有研究表明20代以上的RAW264.7对RANKL几乎不响应。