1.HUVEC背景

HUVEC即人脐静脉内皮细胞，来自于脐带静脉组织。血管内皮细胞合成、分泌凝血和纤溶系统的激活因子和抑制因子、影响血小板粘附和聚集的调节因子，还释放控制细胞增殖和调节血管壁紧张度的分子。这些过程都可以用培养的细胞进行体外研究。而HUVEC是人们进行血管内皮细胞实验时，使用最为广泛的模型细胞。之所以能得到广大科研人员的青睐，源于它具有类似干细胞的增殖潜能--更多的传代次数，理论上可传代50-60次（实际实验中有报道已经可达到近20代）。

2.HUVEC鉴定

（HUVEC人脐静脉内皮细胞）

除了普通的内皮细胞特征例如“鹅卵石状”，HUVEC还有VIII因子（Factor VIII ）阳性、能摄取乙酰基化低密度脂蛋白，CD31阳性等特征。

除形态学和标志物鉴定外，还可通过功能实验--“血管形成实验”进一步鉴别HUVEC。

（HUVEC血管形成实验）

3.HUVEC培养

由于其具有易消化解离、较快的增殖速度以及成熟的培养体系等特点，HUVEC培养在原代细胞培养中属于“入门级”。接下来，亿泽丰小亿给大家分享一下HUVEC培养全攻略（以下步骤以T25培养瓶为例）：

1：包被培养瓶（很多小伙伴发现自己没有包被培养瓶似乎对培养影响不大，但小亿认为复苏和传代前包被培养器皿不仅可以提高细胞贴壁率（减少损失，提高传代次数），还可能在维持HUVEC形态、功能等方面起积极作用。）将牛血浆纤连蛋白储存液于4℃解冻，取适量储存液（推荐用量：2ug/cm²，如T25用量为50ug）用2mLDPBS稀释成工作液后加入T25培养瓶，置于37℃培养箱过夜或至少2小时，使用前去除液体（纤连蛋白工作液可回收使用两次）。

2：HUVEC细胞传代

(1)提前预热培养基至37℃；

(2)弃去培养基，加入5mL DPBS（或无钙镁离子PBS）轻轻晃动培养瓶润洗细胞层，尽量除尽上清后加入1mL0.05％胰酶消化液（含0.02％EDTA），室温或37℃消化至细胞变圆、大部分呈流沙样脱落；

(3)消化完成后，立即加入2-3mL完全培养基(需含10%FBS)或胰酶中和液终止消化，将细胞悬液移至15mL尖底离心管，200 -250 xg室温离心5min;

(4)弃去上清，用手指指肚轻拨离心管底部以分散细胞沉淀，加入新鲜培养基重悬细胞后视推荐传代比例和收获细胞量接种到若干个经纤连蛋白包被的T25培养瓶中；

(5)如使用透气培养瓶可直接放入培养箱，非透气培养瓶请拧松瓶盖后再放入培养箱。

PS：

HUVEC长至汇合时收获量约1*10^5cells/cm^2-1.5*10^5cells/cm^2，复苏和传代时接种密度建议在2*10^4cells/cm2-4*10^4cells/cm^2。